Cainníochtú próitéin dathiméadrach speictrophotiméadrach
De ghnáth meascán próitéiní iad próitéiní. Tá measúnuithe colorimetric bunaithe ar chomhábhair próitéine: imoibríonn aimínaigéid (m.sh., tyrosine, serine) le grúpa nó lí crómagineach breise chun ábhar daite a tháirgeadh. Baineann tiúchan an ábhair dhaite go díreach leis an líon aimínaigí a imoibríonn an próitéin, rud a léiríonn an tiúchan próitéine.
Modh colorimetric
Tá roinnt modhanna ann mar BCA, Bradford, agus Lowry.
Modh Lowry: Bunaithe ar an imoibriú Biúire is luaithe agus a fheabhsaíodh. Imoibríonn an próitéin le Cu2 chun imoibriú gorm a tháirgeadh. Mar sin féin, tá modh Lowry níos íogair ná Biuret. Is é an míbhuntáiste an gá atá le imoibrithe éagsúla a chur go seicheamhach; bíonn an t-imoibriú ar feadh i bhfad; atá inchurtha le substaintí neamh-próitéine; nach bhfuil próitéiní ina bhfuil EDTA, Triton x-100, agus sulfáit amóinia oiriúnach don mhodh seo.
Measúnacht aigéad Bicinchoniinine: Measúnacht próitéine níos nuaí agus níos íogaire é seo. Imoibríonn an próitéin a dhéantar anailís a dhéanamh le Cu2 i dtuaslagán alcaileach chun Cu a tháirgeadh, rud a chiallaíonn sé le BCA chun cumaisc corcra a chruthú le buaic ionsúcháin ag 562 nm. Tá an caidreamh líneach idir tiúchan an chumaisc seo agus an próitéin láidir, agus tá an cumaisc a cruthaíodh tar éis an imoibrithe an-chobhsaí. Maidir leis an modh Lowry, tá an oibríocht simplí agus tá an íogaireacht ard. Mar sin féin, cosúil leis an modh Lowry, tá sé in ann glacadh le próitéiní agus glantaigh.
Modh Bradford: Is é prionsabal an mhodhanna seo ná go n-imoibríonn an próitéin leis an Coomassie Brilliant Blue chun cumaisc dhaite a ghlanadh ag 595 nm. Is í an ghné is mó a íogaireacht, atá dhá uair ó Lowry agus BCA. Tá sé níos simplí agus níos tapúla. Ní éilíonn sé ach aon chineál imoibrí imoibrithe. Is féidir an cumaisc a bheith seasmhach ar feadh 1 uair an chloig chun an toradh a éascú; Ag cur isteach le Lowry, imoibríonn an BCA le gníomhairí laghdaithe (eg DTT, mercaptoethanol) comhoiriúnach. Mar sin féin, tá sé fós íogair do ghlantaigh. Is é an príomh-mhíbhuntáiste gur féidir le caighdeáin éagsúla difríochtaí móra a bheith mar thoradh ar thorthaí an sampla céanna agus gan aon torthaí inchomparáide.
D'fhéadfadh torthaí na dtástálacha dathmhéadracha éagsúla a mheascadh ar roinnt taighdeoirí atá faoi lé tomhais dathiméadracha den chéad uair. Cén cineál modhanna a chreideann tú a mheascadh? Mar gheall ar an bhfíric go ndearna na grúpaí freagairt ar bhealaí éagsúla agus nach bhfuil na grúpaí crómagineacha mar an gcéanna, úsáidtear roinnt modhanna ag an am céanna chun tiúchan samplacha den sampla céanna a chomhréireach. Mar shampla, Keller et al. thástáil an próitéin i mbainne an duine agus fuair sé amach go raibh na tiúchain a thomhas Lowry agus BCA i bhfad níos airde ná mar a bhí Bradford. Bhí an difríocht suntasach. Fiú má chinntear an sampla céanna, tá an sampla caighdeánach a roghnaíodh ag an modh dathmhéadrach céanna neamhréireach, agus ní bhíonn an tiúchan tar éis an tástála neamhréireach freisin. Mar shampla, bain úsáid as Lowry chun tástáil a dhéanamh ar an próitéin sa homogenate ceall, ag baint úsáide as BSA mar chaighdeán, le tiúchan 1.34 mg / ml, agus globulin mar chaighdeán le tiúchan 2.64 mg / ml. Dá bhrí sin, sula roghnaítear modh colorimetric, is fearr tagairt a dhéanamh do chomhdhéanamh ceimiceach an tsampla le tástáil a dhéanamh, agus próitéine caighdeánach den chineál céanna a fháil mar chaighdeán. Ina theannta sin, is minic go mbíonn fadhbanna an-mhéadaithe chun próitéiní a chainníochtú mar thoradh ar fhadhbanna go bhfuil luach absorbance an tsampla ró-íseal, rud a fhágann go bhfuil difríocht mhór idir an tiúchan sampla tomhaiste agus an tiúchan iarbhír. Is í an phríomhcheist ná go bhfuil leathré áirithe ag dath an chuid thábhachtach den speictrophotiméadar 1011, an cuvette, agus mar sin déanann gach modh dathmhéadrach an t-am tástála imoibriúcháin a liostáil. Ní mór tástáil a dhéanamh ar gach sampla (lena n-áirítear samplaí caighdeánach) laistigh den am seo. Má tá an t-am ró-fhada, laghdaítear an luach ionsúcháin a fhaightear agus laghdaíonn an luach tiúchana athshóite. Ina theannta sin, tá an teocht imoibrithe, luach pH an tuaslagáin, etc. fachtóirí tábhachtacha uile a théann i bhfeidhm ar an turgnamh. Ina theannta sin, tá sé an-tábhachtach úsáid a bhaint as dathdhéadra plaisteach. Ná seachain cuveteanna a dhéantar as grianchloch nó le gloine a úsáid mar gheall ar an dath tar éis imoibriú a chur faoi deara go mbeidh grianchloch nó gloine daite, rud a fhágann go n-ionsódh an sampla míchruinn.
Déanann an chuideachta sainfheidhmiú ar dhíol speictrophotometers , fáilte roimh chustaiméirí a bhfuil gá leo dul i gcomhairle agus a cheannach, cuirfimid seirbhísí dílis agus cáilíochta ar fáil duit, chomh maith le praghsanna níos ísle.
R-phost: info@sumerlab.com
Gréasáin: sumerinstrument.com